La técnica de ELISA con antígenos del fluido seudocelómico de Ascaris suum en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar experimental
Se extrajo liquido seudocelómico de A. suum hembras entre el ano y la parte final. La técnica de ELISA-IgG indirecta: (i) las placas de poliestireno en pocillos de fondo plano se sensibilizaron con 50µL de líquido seudocelómico (15.82 ug/ mL) de A. suum, (ii) se incubaron a 4ºC por 18 horas, (iii) se lavó tres veces con 50µL por pocillo de PBS (pH 7.26) y Tween 20(0,05%), durante 5 minutos cada vez, (iv) se bloquearon los sitios de unión inespecíficos con 50µL de leche en polvo (2.5%) diluida en PBS (pH 7.26) y Tween 20(0,05%), (v) se incubó a 37ºC durante 1 hora, (vi) se lavó de modo similar a como se hizo en el paso iii, (vii) se agregó el suero (1/200) problema en volumen de 50 µL e incubar a 37ºC por 1 hora, (viii) se lavó de modo similar a las anteriores, (ix) se agregó el conjugado Anti-mouse IgG –BioRad- (1/1500), (x) se incubó a 37ºC durante 1 hora, (xi) se lavó nuevamente y se agregó 50 µL del sustrato ODP 0,04% en tampón citrato a pH 5,0 y peróxido de hidrógeno 0,03%, (xii) se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos y (iii) se detuvo la reacción enzimática con 50µL de ácido sulfúrico 2N y se realizó la lectura de la absorbancia a 492 nm usando lector de ELISA (Perkin-Elmer). (1)
1. Gálvez, R. A., Polo, E. A., Mantilla, W. C., Amaya, J. Q., Gutiérrez, M. R., & Jara, C. A. La técnica de ELISA con antígenos del fluido seudocelómico de Ascaris suum en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar experimental. Revista REBIOLES.(online) 2015. (citado 26/05/2017). Disponible en: revistas.unitru.edu.pe/index.php/ECCBB/article/view/752
No hay comentarios.:
Publicar un comentario