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sábado, 27 de mayo de 2017

TÉCNICA DE ELISA EN NEUMONÍA



La técnica de ELISA con antígenos del fluido seudocelómico de Ascaris suum en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar experimental 


Se extrajo liquido seudocelómico de A. suum hembras entre el ano y la parte final. La técnica de ELISA-IgG indirecta: (i) las placas de poliestireno en pocillos de fondo plano se sensibilizaron con 50µL de líquido seudocelómico (15.82 ug/ mL) de A. suum, (ii) se incubaron a 4ºC por 18 horas, (iii) se lavó tres veces con 50µL por pocillo de PBS (pH 7.26) y Tween 20(0,05%), durante 5 minutos cada vez, (iv) se bloquearon los sitios de unión inespecíficos con 50µL de leche en polvo (2.5%) diluida en PBS (pH 7.26) y Tween 20(0,05%), (v) se incubó a 37ºC durante 1 hora, (vi) se lavó de modo similar a como se hizo en el paso iii, (vii) se agregó el suero (1/200) problema en volumen de 50 µL e incubar a 37ºC por 1 hora, (viii) se lavó de modo similar a las anteriores, (ix) se agregó el conjugado Anti-mouse IgG –BioRad- (1/1500), (x) se incubó a 37ºC durante 1 hora, (xi) se lavó nuevamente y se agregó 50 µL del sustrato ODP 0,04% en tampón citrato a pH 5,0 y peróxido de hidrógeno 0,03%, (xii) se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos y (iii) se detuvo la reacción enzimática con 50µL de ácido sulfúrico 2N y se realizó la lectura de la absorbancia a 492 nm usando lector de ELISA (Perkin-Elmer). (1)


FUENTE:
1. Gálvez, R. A., Polo, E. A., Mantilla, W. C., Amaya, J. Q., Gutiérrez, M. R., & Jara, C. A. La técnica de ELISA con antígenos del fluido seudocelómico de Ascaris suum en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar experimental. Revista REBIOLES.(online) 2015. (citado 26/05/2017). Disponible en: revistas.unitru.edu.pe/index.php/ECCBB/article/view/752