PRUEBA DE PCR

PCR DE NEUMONÍA

Tema: Direct Detection of Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus in Sputum Specimens from Patients with Hospital-Associated Pneumonia Using a Novel Multilocus Pcr Assay 

Objetivos: Identificar el MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) para un diagnóstico rápido de neumonía mediante el uso de PCR basado en fluorescencia en la detección de mecA y genes nuc.

Muestra: Esputo

Ácido nucleico: ADN infectado

Gen: mecA y nuc

PCR: PCR en tiempo real

Visualización: Centrifugación a alta velocidad con fluoresceína FAM (para nuc) y HEX (para mecA)

De muestras de esputo se extrajo ADN mediante centrifugación a alta velocidad, utilizando Straphylococcus aureus y el kit MRSA se diseñaron secuencias de cebadores nuc (marcada con fluoresceína FAM) y mecA (marcada con HEX). El perfil del ciclo PCR se realizó en 4 etapas: (1) 37 °C por 2 min; (2) 94 °C por 2 min; (3) 94 °C por 20 s y 55 °C por 45 s, 10 ciclos; (4) 94 °C for 20 s y 55 °C por 45 s, 25 ciclos. La señal de fluorescencia fue recogida en esta etapa. La presencia del gen nuc identificó la presencia de S. aureus y la presencia de mecA en cepas de S. aureus indicó la presencia de MRSA.(1)

FUENTE:
1.Huang, Z. G., Zheng, X. Z., Guan, J., Xiao, S. N., & Zhuo, C.Direct detection of methicillin-resistant staphylococcus aureus in sputum specimens from patients with hospital-associated pneumonia using a novel multilocus Pcr assay. (online) 2015 (citado 20/05/2017). Disponible en: www.mdpi.com/2076-0817/4/2/199