STEM CELLS

Therapeutic effects of human mesenchymal stem cell–derived microvesicles in severe pneumonia in mice.

TIPO: Células madre hematopoyéticas de médula ósea- mesenquimáticas

OBTENCIÓN: MSC derivados de la médula ósea humana fueron obtenidos de un repositorio de los Institutos Nacionales de Salud de Texas A & M HealthScience Center. Se usaron fibroblastos pulmonares humanos normales (NHLF) como controles celulares.

RESULTADOS:

• Mejorar supervivencia en ratones con neumonía
• Mejora la fagocitosis de bacterias por los monocitos
• Reduce la inflamación y aumenta niveles de ATP en neumocitos tipo 2
• Son eficaces para el uso terapéutico de neumonía

FUENTE:

1. Monsel, A., Zhu, Y. G., Gennai, S., Hao, Q., Hu, S., Rouby, J. J., ... & Lee, J. W. . Therapeutic effects of human mesenchymal stem cell–derived microvesicles in severe pneumonia in mice. American journal of respiratory and critical care medicine. (online). 2015. (citado 15/06/2017). Disponible en: www.atsjournals.org/doi/abs/10.1164/rccm.201410-1765OC

EJEMPLO DE TRANSGÉNICO

GENERACIÓN DE UNA VACUNA RECOMBINANTE CONTRA EL VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL CAUSANTE DE NEUMONÍA

Utilizando al bacilo de Calmette‐Guerin (BCG) como vector de antígenos de VRS se creó una vacuna efectiva contra VRS, ya  que sin este vector sería impedida por las propiedades inmunopatológicas de la infección, pues ciertos antígenos de VRS inducen una respuesta inmune nociva, conocida como Th2, la que se basa en anticuerpos y linfocitos T propios de respuestas inmunes alérgicas. Además de no ser protectora, este tipo de respuesta inmune Th2 exacerba los síntomas respiratorios causados por VRS, llevando incluso a secuelas como asma bronquial. Este proyecto consistió en la generación de una vacuna que induzca una respuesta inmune de tipo Th1, basada en linfocitos T citotóxicos, que sea protectora y segura. (1)

 Fuente:

1. KALERGIS, A. M. GENERACION DE UNA VACUNA RECOMBINANTE CONTRA EL VIRUS RESPIRATORIO SINCICIAL.(online) 2014. (citado 10 /06/ 2017). Disponible en : 146.83.150.183/handle/10533/90779

ADN RECOMBINANTE EN NEUMONÍA

ADN RECOMBINANTE EN NEUMONÍA

 En los linajes PMEN1 y CC180 , el proceso de recombinación homóloga fue mejor descrito por un modelo heterogéneo de recombinación con reemplazos simples, cortos y frecuentes, llamados micro-recombinaciones, y reemplazos salterales más raros, multi-fragmentos, llamados Macro-recombinaciones, la la cual se asoció con cambios fenotípicos importantes, incluidos los episodios de conmutación de serotipos (importante impulsor de la diversificación del patógeno). (1)

FUENTE:

1. Mostowy. R , Croucher. N , Hanage. W,  Harris. S, Bentley. S, Fraser. C.Heterogeneity in the Frequency and Characteristics of Homologous Recombination in Pneumococcal Evolution. Plos genetics. (online). 2014. (citado 1/06/2017). Disponible en: journals.plos.org/plosgenetics/article?id=10.1371/journal.pgen.1004300

ADN RECOMBINANTE

ADN RECOMBINANTE EN LA NATURALEZA

La naturaleza crea sus propios transgénicos, un ejemplo es la mariposa que tiene genes de la avispa de la familia de los bracónidos en su interior, estas avispas parasitan las larvas de mariposa y de polillas inyectando partículas virales que bloquean las defensas de la larva, en este ciclo las larvas de huéspedes adquieren estos genes los cuales se han ido incorporando en los ùltimos cientos de años. La función que cumplen es de proteccion en frente a ciertos patógenos, especialmente en la agricultura. (1)

https://pirman.es/images/ampliadas/avispas-gen-mariposa.jpg

FUENTE: 

1. Gasmi. l, Boulain. H, Gauthier. J, Hua-Van, A, Musset. K, Jakubowska. A, Aury. J.M, Volkoff. A.N, Huguet. E, Herrero. S, Drezen. J.M. Recurrent Domestication by Lepidoptera of Genes from Their Parasites Mediated by Bracoviruses. Plos genetics. (online). 2015. (citado 28/05/2017). Disponible en: http://journals.plos.org/plosgenetics/article?id=10.1371/journal.pgen.1005470

TÉCNICA DE ELISA EN NEUMONÍA

La técnica de ELISA con antígenos del fluido seudocelómico de Ascaris suum en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar experimental 

Se extrajo liquido seudocelómico de A. suum hembras entre el ano y la parte final. La técnica de ELISA-IgG indirecta: (i) las placas de poliestireno en pocillos de fondo plano se sensibilizaron con 50µL de líquido seudocelómico (15.82 ug/ mL) de A. suum, (ii) se incubaron a 4ºC por 18 horas, (iii) se lavó tres veces con 50µL por pocillo de PBS (pH 7.26) y Tween 20(0,05%), durante 5 minutos cada vez, (iv) se bloquearon los sitios de unión inespecíficos con 50µL de leche en polvo (2.5%) diluida en PBS (pH 7.26) y Tween 20(0,05%), (v) se incubó a 37ºC durante 1 hora, (vi) se lavó de modo similar a como se hizo en el paso iii, (vii) se agregó el suero (1/200) problema en volumen de 50 µL e incubar a 37ºC por 1 hora, (viii) se lavó de modo similar a las anteriores, (ix) se agregó el conjugado Anti-mouse IgG –BioRad- (1/1500), (x) se incubó a 37ºC durante 1 hora, (xi) se lavó nuevamente y se agregó 50 µL del sustrato ODP 0,04% en tampón citrato a pH 5,0 y peróxido de hidrógeno 0,03%, (xii) se incubó a temperatura ambiente durante 30 minutos y (iii) se detuvo la reacción enzimática con 50µL de ácido sulfúrico 2N y se realizó la lectura de la absorbancia a 492 nm usando lector de ELISA (Perkin-Elmer). (1)

FUENTE:
1. Gálvez, R. A., Polo, E. A., Mantilla, W. C., Amaya, J. Q., Gutiérrez, M. R., & Jara, C. A. La técnica de ELISA con antígenos del fluido seudocelómico de Ascaris suum en el diagnóstico de la ascariasis pulmonar experimental. Revista REBIOLES.(online) 2015. (citado 26/05/2017). Disponible en: revistas.unitru.edu.pe/index.php/ECCBB/article/view/752

PRUEBA DE PCR

PCR DE NEUMONÍA

Tema: Direct Detection of Methicillin-Resistant Staphylococcus Aureus in Sputum Specimens from Patients with Hospital-Associated Pneumonia Using a Novel Multilocus Pcr Assay 

Objetivos: Identificar el MRSA (Methicillin-resistant Staphylococcus aureus) para un diagnóstico rápido de neumonía mediante el uso de PCR basado en fluorescencia en la detección de mecA y genes nuc.

Muestra: Esputo

Ácido nucleico: ADN infectado

Gen: mecA y nuc

PCR: PCR en tiempo real

Visualización: Centrifugación a alta velocidad con fluoresceína FAM (para nuc) y HEX (para mecA)

De muestras de esputo se extrajo ADN mediante centrifugación a alta velocidad, utilizando Straphylococcus aureus y el kit MRSA se diseñaron secuencias de cebadores nuc (marcada con fluoresceína FAM) y mecA (marcada con HEX). El perfil del ciclo PCR se realizó en 4 etapas: (1) 37 °C por 2 min; (2) 94 °C por 2 min; (3) 94 °C por 20 s y 55 °C por 45 s, 10 ciclos; (4) 94 °C for 20 s y 55 °C por 45 s, 25 ciclos. La señal de fluorescencia fue recogida en esta etapa. La presencia del gen nuc identificó la presencia de S. aureus y la presencia de mecA en cepas de S. aureus indicó la presencia de MRSA.(1)

FUENTE:
1.Huang, Z. G., Zheng, X. Z., Guan, J., Xiao, S. N., & Zhuo, C.Direct detection of methicillin-resistant staphylococcus aureus in sputum specimens from patients with hospital-associated pneumonia using a novel multilocus Pcr assay. (online) 2015 (citado 20/05/2017). Disponible en: www.mdpi.com/2076-0817/4/2/199

PRUEBAS DE TAMIZAJE Y CONFIRMACIÓN

PRUEBAS DE TAMIZAJE Y CONFIRMACIÓN PARA NEUMONÍA

Un ejemplo de prueba de tamizaje para Mycoplasma pneumoniae son: técnicas serológicas por ELISA ,de fácil realización, más sensible que cultivo para infección aguda y comparable a la reacción de polimerasa en cadena en inmunocompetentes. La IgM se eleva luego de la primera semana, y antecede en dos semanas la elevación de IgG; sin embargo, pueden detectarse IgM hasta 12 meses tras la infección aguda. (1)

ELISA test

Un ejemplo de prueba confirmatoria es la PCR en Klebsiella pneumoniae: 

Identificación  del gen blaSHV-5, el ADN plasmídico de los aislamientos de K.pneumoniae y de los transconjugantes portadores de un solo plásmido se amplifica por reacción en cadena de la polimerasa para la identificación del gen blaSHV-5. Se pueden utilizan los iniciadores A (5’-ACTGAATGAGGCGCTTCC) y B (5’-TCCCGCAGATAAATCACC) siguiendo las condiciones de amplificación.(2)

FUENTES:
1.Sepúlveda, A., Castet, A., & Bertrand, P. Neumonía por bacterias atípicas: mycoplasma y Chlamydia pneumoniae¿ qué elementos tenemos para hacer un diagnóstico adecuado y decidir cuándo tratar?. Neumol. pediátr.(Online). 2015. (citado 6/05/2017). Disponible en: www.neumologia-pediatrica.cl/PDF/2015103/neumonia-bacteria.pdf
2.Espinal, P. A., Mantilla, J. R., Saavedra, C. H., Leal, A. L., Alpuche, C., & Valenzuela, E. M. Epidemiología molecular de infección nosocomial por Klebsiella pneumoniae productora de beta-lactamasas de espectro extendido. Biomédica. (online) 2004. (citado 6 /05/2017). Disponible en:www.researchgate.net/profile/Aura_Leal-Castro/publication/8175209_Molecular_epidemiology_of_nosocomial_infection_by_extended-spectrum_beta-lactamases-producing_Klebsiella_pneumoniae/links/541b42590cf2218008c1295f.pdf

EPIGENÉTICA

EPIGENÓMICA DE NEUMONÍA

Los mecanismos epigenéticos interfieren en los efectos del ambiente en el genoma , ya que controla la actividad transcripcional de genes específicoss. Existen varios mecanismos que gobiernan la expresión de un gen (metilación de ADN, complejos asociados a cromatina, decodificación de ARN y modificación de histonas). En personas con enfermedades respiratorias tienen aumento de la actividad de la histona acetiltransferasa y reducida actividad de la histona deacetilasa. En infecciones en que la bacteria induce a desregulaciones epignéticas afectando la estructura de la cromatina y programas transcripcionales de las células que puede afectar la función de la célula , promoviendo defensa o permitiendo la presencia del patógeno. (1) y (2)

Fuentes:

1.Schwartz. D.Epigenetics and Environmental Lung Disease. Proceedings of the American Thoracic Society.(online). 2010. (citado 6/05/2017). Disponible en: http://www.atsjournals.org/doi/full/10.1513/pats.200908-084RM

2.Bierne.H., Harmon. M.,Cossart.P. Epigenetics and Bacterial Infections. Cold Spring Harbor Perspectives in Medicine. (online) 2012. (citado 6/05/2017). Disponible en:https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3543073/l

TRADUCCIÓN DE ADN

ALTERACIONES EN LA TRADUCCIÓN- NEUMONÍA

El streptococcus pneumoniae es el agente causal más importante de la neumonía, el cual se destaca por impedir la acción de diferentes antimicrobianos. La resistencia del neumococo a la penicilina y cefalosporinas está determinada por cambios en la configuración de las PBP (enzimas responsables de la síntesis de la pared celular bacteriana) está cromosomalmente determinado y condiciona una disminución en la afinidad de la unión del antibiótico a las PBP y por lo tanto una disminución en la eficacia de este en su acción bactericida.(1) y (2).

FUENTES: 

1. Sanabria, G., Araya, S., Chamorro, G., Lovera, D., & Arbo, A. Correlación de serotipos, sensibilidad y resistencia antimicrobiana en niños con infecciones invasivas por Streptococcus pneumoniae en un centro de referencia de Asunción–Paraguay. Revisión de 6 años. Revista del Instituto de Medicina Tropical, . (online) 2014. (citado 17/ 06/ 2017). Disponible en: s3.amazonaws.com/academia.edu.documents/41654533/158-489-1-PB.pdf?AWSAccessKeyId=AKIAIWOWYYGZ2Y53UL3A&Expires=1497808969&Signature=vGvsBQgDLLsDOqzGHviRXKWq2Fs%3D&response-content-disposition=inline%3B%20filename%3DCorrelacion_de_serotipos_sensibilidad_y.pdf

2.Cardinal-Fernández, P., Gabarrot, G. G., Echeverria, P., Zum, G., Hurtado, J., & Rieppi, G. . Aspectos clínicos y microbiológicos de la neumonía aguda comunitaria a Streptococcus pneumoniae. Revista Clínica Española.. (online) 2013 .(citado 17/06/2017). Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0014256512004092 

TRANSCRIPCIÓN DE ADN

ALTERACIONES EN LA TRANSCRIPCIÓN - NEUMONÍA

Klebsiella pneumoniae

La neumonía puede se causada por varios agentes, entre estos se encuentra la bacteria gram negativa Klebsiella pneumoniae, que es responsable aproximadamente el 20% de neumonías. Esta bacteria ha sido estudiada por su resistencia al antibiótico polimixina, y se ha comprobado que cuenta con 3 receptores que detectan el antibiótico y produce cambios en su transcripción: acentuando la expresión de su cápsula y transformando la estructura de su lipopolisacárido (1) (más asimétrico). El LPS es importante en la filtración de moléculas tóxicas y la formación del espacio periplásmico.(2)

FUENTES:

1. Europa press. Descubren como bacteria causante de neumonias resiste al ultimo antibiotico desarrollado para su tratamiento. (online). 2011. ( citado 15/04/2017). Disponible en: http://www.infosalus.com/salud-investigacion/noticia-descubren-bacteria-causante-neumonias-resiste-ultimo-antibiotico-desarrollado-tratamiento-20110905120756.html

2. Balear, G. Papel del lípido A de Klebsiella pneumoniae en el control de la respuesta inmune. (online). 2014 (citado 15 /04 /2017). Disponible en: http://www.tdx.cat/bitstream/handle/10803/284210/tvmm1de1.pdf?sequence=1

REPLICACIÓN DE ADN

ALTERACIONES EN LA GENÓMICA/ REPLICACIÓN- NEUMONÍA

El adenovirus con serotipo B1 suele serla causa más común de neumonía, junto con sus receptores CD46, CD 80 Y CD86. (1) Su replicación ocurre en el núcleo, siendo la proteína viral el primer, junto con 2 proteínas codificadas por el virus: Ad DBP y Ad DNA polimerasa. Durante la replicación viral se producen proteínas tempranas inmediatas (E1A), tempranas (E1B, E2A, E2B, E3, E4) y proteínas tardías (p. virales). (2)

FUENTES:

1. Wurzel, D. F., Mackay, I. M., Marchant, J. M., Wang, C. Y., Yerkovich, S. T., Upham, J. W., ... & Chang, A. B. Adenovirus species C is associated with chronic suppurative lung diseases in children. Clinical Infectious Diseases, 59(1), 34-40.(online) 2014. (citado 15/04/2017). Disponible en: academic.oup.com/cid/article/59/1/34/403624/Adenovirus-Species-C-Is-Associated-With-Chronic

2. Gonzalo-de-Liria, C. R., & Hernández, M. M. Infecciones víricas del tracto respiratorio inferior. PediatríaIntegral. (online) 2016.(citado 15/05/2017). Disponible en: www.pediatriaintegral.es/wp-content/uploads/2016/03/Pediatria-Integral-XX-1_WEB.pdf#page=19

¿QUÉ ES LA NEUMONÍA?

DEFINICIÓN DE NEUMONÍA

La neumonía representa un proceso inflamatorio del pulmón, en el que se acumula secreciones organizadas o masas tumoradas que reemplazan el aire, y hacen que el parénquima se torne sólido o compacto que bien podría deberse a la presencia de organismos no especificados (1) o a microorganismos como virus o bacterias determinados. Según la Sociedad Americana de Tórax y la Sociedad Americana de Enfermedades Infecciosas (ATS/IDSA) se distinguen 3 tipos de neumonía: neumonía adquirida en el Hospital , asociada a Ventilador y a cuidados de la salud. (2)

Fuentes:

1. Vila, S. P., Álvarez, U. C., Castels, R. A., & Suárez, J. R. Neumonía nasocomial. Medicine- Programa de Formación Médica Continuada Acreditado.[Online].2016.[citado 1 de abril 2017]. 9(65), 4198-4204. Disponible en: http://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0211344906744058 

2.Rudan, I., O’brien, K. L., Nair, H., Liu, L., Theodoratou, E., Qazi, S., ... & Child Health Epidemiology Reference Group. Epidemiology and etiology of childhood pneumonia in 2010: estimates of incidence, severe morbidity, mortality, underlying risk factors and causative pathogens for 192 countries. Journal of global health,. (online). 2013. (citado 15/06/2017).  Disponible en: www.atsjournals.org/doi/abs/10.1164/rccm.201410-1765OC

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